Medición de la concentración de la suspensión bacteriana de Staphylococcus aureus mediante espectrofotometría

Existe una técnica para medir aproximadamente la concentración de la suspensión bacterianade Staphylococcus aureus mediante espectrofotometría. El objetivo del experimento es crear una curva estándar midiendo simultáneamente la absorbancia de una solución bacteriana y realizando un recuento de colonias en placa. Una vez establecida la curva estándar, el valor de absorbancia puede utilizarse para determinar indirectamente la concentración de la suspensión bacteriana.

Enel experimento se utiliza un espectrofotómetro UV visible o espectrofotómetro visible con una longitud de onda de 600 nm y un grosor de cubeta de 1 cm. El control en blanco y el diluyente es una solución estéril de cloruro sódico al 0,9%. La especie bacteriana utilizada es Staphylococcus aureus, cultivada en un medio de caldo nutritivo.

El procedimiento experimental es el siguiente:

1. El Staphylococcus aureus se inocula en un medio de caldo nutritivo y se cultiva en una incubadora a temperatura constante de 30-35℃ durante 18-24 horas.
2. A continuación, las bacterias cultivadas se diluyen con una solución estéril de cloruro sódico al 0,9% en una sala estéril de presión positiva para crear siete concentraciones diferentes de suspensión bacteriana. Esto se hace añadiendo 0,1 ml, 0,2 ml, 0,3 ml, 0,4 ml, 0,5 ml, 0,6 ml y 0,7 ml del cultivo en caldo nutritivo a 10 ml de solución estéril de cloruro sódico al 0,9%.
3. A continuación, se llevan a cabo los dos métodos para determinar la concentración bacteriana:
   • Método de recuento de colonias en placa: Se esparcen 0,2 ml de cada suspensión bacteriana en dos placas de agar nutritivo. Tras incubar a 37℃ durante 72 horas, se cuentan las colonias en placas con 30-300 colonias. El recuento medio de colonias se utiliza para calcular la concentración bacteriana de la solución original, que sirve como concentración estándar.
   • Método de espectrofotometría: Se mide la absorbancia de cinco de las suspensiones bacterianas originales a una longitud de onda de 600 nm. Se utiliza una solución estéril de cloruro sódico al 0,9% como control en blanco y se registran los valores de absorbancia de cada suspensión bacteriana original.

A continuación, se crea una curva estándar trazando los valores de absorbancia frente a las concentraciones bacterianas estándar correspondientes obtenidas a partir de los recuentos de colonias en placa. La tabla siguiente muestra los valores de absorbancia registrados para cada una de las siete suspensiones bacterianas originales: