Cómo calibrar una pipeta

Calibrar una pipeta utilizando una balanza analítica es un método estándar en los laboratorios.
Los pasos detallados son los siguientes:

1. Preparación previa a la calibración:
Requisitos ambientales
Temperatura: La temperatura ambiente debe ser estable a 20 ± 1°C. Las fluctuaciones significativas de temperatura pueden afectar a la densidad del líquido.
Corrientes de aire y vibraciones: Evite las corrientes de aire y las vibraciones. Apague las campanas extractoras y asegúrese de que la balanza está aislada de cualquier fuente de vibración.
Humedad: Mantenga una humedad relativa del 45%-65% para evitar la evaporación rápida del líquido.

2. Instrumentos y consumibles

La pipeta a calibrar Puntas de pipeta originales.
Una balanza analítica (legibilidad de 0,1 mg o mejor), que haya sido calibrada recientemente y esté perfectamente nivelada.
Una botella de agua destilada o desionizada (la densidad a 20°C es de aproximadamente 1 g/mL).
Un vaso de precipitados limpio (50-100 mL) para recibir el agua para pesar.
Un termómetro para medir la temperatura del agua para la corrección de la densidad.

3. Pasos de calibración (Ejemplo: pipeta monocanal de 100-1000 µL)

1. Establezca los volúmenes de calibración
Basándose en el rango de la pipeta, seleccione tres puntos de calibración (esto se conoce como calibración de tres puntos). Normalmente se fijan en el 10%, el 50% y el 100% del volumen nominal.

Ejemplo: Para una pipeta de 1000 µL, los puntos de calibración son 100 µL, 500 µL y 1000 µL.
(Gire el mando de ajuste de volumen de la pipeta hasta el volumen objetivo. No gire el mando más allá del límite de volumen máximo).

2. Tarar la balanza

Coloque el vaso vacío sobre el platillo de la balanza y pulse la tecla “Tara” o “Cero”.

3. Aspire y pese (repita 3 veces para cada volumen)

Procedimiento de aspiración:

Coloque una nueva punta de pipeta, asegurando un cierre firme y hermético.
Presione el émbolo lenta y suavemente hasta el primer tope. Sumerja la punta verticalmente de 1 a 3 mm por debajo de la superficie del agua destilada (evite sumergirla demasiado, ya que el exceso de agua podría adherirse al exterior de la punta).

Suelte el émbolo lenta y suavemente para aspirar el agua. Espere 1-2 segundos para asegurarse de que se ha aspirado todo el volumen de líquido en la punta y, a continuación, retire la punta del agua.

Procedimiento de dispensación y pesaje:

Coloque la punta contra la pared interior del vaso de precipitados. Presione el émbolo lenta y suavemente hacia abajo hasta el primer tope. Haga una pausa de 1-2 segundos y, a continuación, presione el émbolo hacia abajo hasta el segundo tope (la posición de “soplado”) para expulsar el líquido restante.

Manteniendo el émbolo totalmente presionado, deslice la punta hacia arriba por la pared interior para extraerla del vaso y, a continuación, deje que el émbolo vuelva a su posición de reposo.

Anote la masa que aparece en la balanza (en mg). Ponga la balanza a cero antes de la siguiente medición.

Repita los pasos de aspiración y dispensación al menos 3 veces para cada punto de calibración y calcule la masa media.

4. Corrección de la temperatura (Paso clave)
Si la temperatura del agua no es exactamente de 20°C, deberá aplicar una corrección de densidad a la masa.

Ejemplo: A 25°C, la densidad del agua es de 0,99704 g/mL. La masa teórica de 1000 µL (1 mL) de agua a esta temperatura sería de 997,04 mg.

7.4.4 Procedimientos posteriores a la calibración

Si el error calculado está dentro de la tolerancia especificada por el fabricante, la pipeta puede seguir utilizándose.

Si el error está fuera del rango aceptable, la pipeta debe ajustarse utilizando su herramienta de calibración (algunos modelos tienen una función de calibración incorporada u oculta).

Limpie la pipeta: Limpie el exterior con etanol al 75% y asegúrese de que el eyector de puntas funciona correctamente.

7.4.5 Precauciones

Accione siempre el émbolo lenta y suavemente durante la aspiración y la dispensación para minimizar la formación de burbujas de aire.

La desviación (precisión) para mediciones múltiples en el mismo punto de calibración debe ser ≤ 1%.

7.4.6 Mantenimiento rutinario de la pipeta

Limpieza diaria: Al final de cada día, o si se produce un derrame, limpie el exterior de la pipeta con un paño sin pelusa y una solución de etanol al 70%.

Inspección periódica: Los usuarios deben inspeccionar periódicamente la pipeta para detectar cualquier signo de daño físico, como grietas en el mango, muescas en el cono de puntas o corrosión. El cono de puntas debe mantenerse limpio y libre de cualquier residuo de muestra.

Almacenamiento adecuado: Cuando no se utilice, ajuste el volumen de la pipeta al máximo. Esto alivia la tensión del muelle interno y prolonga su vida útil. Guarde siempre las pipetas verticalmente en un soporte o carrusel específico para pipetas. Nunca coloque una pipeta horizontalmente sobre la mesa del laboratorio.